胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 含酚红 100ml

   胰蛋白酶 - EDTA 消化液（0.25%）含酚红是细胞培养中常用的细胞解离试剂，主要用于将贴壁生长的细胞从培养容器表面分离下来，以便进行细胞传代、计数、冻存或其他实验操作。   

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，使组织或贴壁细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。

  本品经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

主要成分及作用

1. 胰蛋白酶（0.25%）
   胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，来源于牛或猪的胰腺，其主要作用是水解细胞间以及细胞与培养容器表面连接的蛋白质（如胶原蛋白、纤维连接蛋白等），使贴壁细胞脱离基质，分散成单个细胞或小细胞团。0.25% 是细胞培养中常用的浓度，适用于多数哺乳动物细胞（如 HeLa、CHO、293T 等）。

2. EDTA
   EDTA（乙二胺四乙酸）是一种螯合剂，其作用是结合细胞外液中的钙离子（Ca²⁺）和镁离子（Mg²⁺）。这些离子在维持细胞间连接和细胞贴壁中起重要作用，EDTA 通过螯合它们，破坏细胞间的黏附，增强胰蛋白酶的解离效果，提高细胞分散效率。

3. 酚红
   酚红是一种 pH 指示剂，在溶液中随 pH 变化呈现不同颜色：

• 中性偏碱（pH 7.2-7.4，适合细胞培养的环境）时呈红色；

• 酸性条件下（pH < 6.8）呈黄色；

• 碱性过强（pH > 7.6）时呈紫色。
  其作用是直观反映消化液的 pH 变化，确保溶液处于适合细胞存活的酸碱环境，同时提示是否需要调整或更换试剂。

溶液特性

• 外观：通常为红色澄清液体（因含酚红，且 pH 维持在 7.2-7.4 左右）。冻存状态可能存在颜色不均匀现象，不影响正常使用。

• 渗透压：与细胞培养液渗透压相近，避免细胞因渗透压剧烈变化而受损。

• 储存条件：需在 - 20℃冷冻保存，有效期1年，避免反复冻融（可分装后使用）；解冻后短期（1-2 周）可存放于 4℃，但需尽快使用，以防胰蛋白酶活性下降。

使用方法：

1. 贴壁细胞的消化：

a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶消化液，盖过细胞即可，室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

d) 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2. 组织的消化：

不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：

1．由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定最佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况；

2．本产品不含抑菌剂，在使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染；

3．不宜4℃长期保存，切忌反复冻融，小量使用时建议分装冻存；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

适用场景

• 贴壁细胞的传代培养（最主要用途）；

• 细胞计数前的分散处理；

• 细胞冻存前的单细胞悬液制备；

• 细胞分离、纯化或转染前的预处理等。