DAPI 是一种小分子荧光染料（分子量约 350 Da），外观呈淡黄色至绿色粉末，易溶于水及有机溶剂（如 DMSO、甲醇），在溶液中稳定性较好。其自身荧光较弱，但与双链 DNA 结合后荧光强度显著增强（约 20 倍）。DAPI-DNA 复合物的激发波长约为 358 nm，发射波长约为 461 nm，产生明亮的蓝色荧光，可通过荧光显微镜或流式细胞仪的蓝光通道进行检测。

基本信息

• CAS 号：28718-90-3

• 中文名称：4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐

• 英文名称：DAPI

• 别名：4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride; CP-529414

• 分子式：C₁₆H₁₅N₅·2HCl

• 分子量：350.25

• 溶解性：Soluble in Water/DMSO ≥10 mg/mL

• 纯度：≥98%

• 外观（性状）：Light yellow to green Solid

储存条件

• 粉末状态：-20℃ 可保存 2 年。

• 配成母液后：-20℃ 可保存 6 个月；若置于 -80℃ 可保存 1 年。

• 注意事项：无论哪种状态，均建议避光保存，并尽量避免反复冻融。

作用机制
DAPI 的核心作用是与双链 DNA（dsDNA）特异性结合，具体机制如下：

1. 嵌入结合：其分子结构中的吲哚环可嵌入 DNA 双链的 AT 碱基对之间（对 AT 富集区域亲和力更高），形成稳定的复合物。

2. 荧光增强：结合后，染料分子的荧光量子产率大幅提升，从而实现对 DNA 的特异性标记。

注：DAPI 也可与 RNA 结合，但结合能力较弱（约为 DNA 的 1/5），且荧光发射波长略偏绿（约 480 nm）。在实验中通常可通过 RNA 酶预处理来消除 RNA 的干扰。

使用方法

1. 溶液配制

• 储存液：用去离子水或 PBS 配制 1-10 mg/mL 的浓缩液，0.22 μm 滤膜过滤除菌，分装后于 **-20℃避光保存 **（可稳定 1 年以上，避免反复冻融）。

• 工作液：使用前用缓冲液（如 PBS、培养基）稀释储存液，常规浓度为1-5 μg/mL（根据实验需求调整，如活细胞染色可适当降低浓度至 0.1-1 μg/mL 以减少毒性）。

2. 染色步骤

• 固定细胞染色（推荐）：

• 1 细胞经甲醛或多聚甲醛固定（10-30 分钟），PBS 洗涤 2-3 次；

• 2（可选）用 0.1% Triton X-100 透化处理 5-10 分钟（增强染料对细胞核的穿透性），PBS 洗涤；

• 3 加入 DAPI 工作液，室温避光孵育 5-15 分钟；

• 4 PBS 洗涤 2-3 次以去除未结合的染料，即可进行荧光成像。

• 活细胞染色：
  直接向培养基中加入 DAPI 工作液（终浓度 0.1-1 μg/mL），37℃孵育 5-30 分钟，洗涤后观察（注意：长时间孵育可能对活细胞产生毒性，建议缩短染色时间）。

注意事项

1. 毒性与安全性：

• DAPI 对细胞有一定毒性（尤其高浓度时），活细胞染色需控制浓度和时间；

• 具有潜在致畸性和致癌性，操作时需戴手套、护目镜，避免直接接触皮肤或吸入。

2. 荧光稳定性：

• DAPI 荧光在强光下易淬灭，染色后需避光保存，成像时尽量缩短曝光时间。

3. 特异性优化：

• 若需排除 RNA 干扰，可在染色前用 RNA 酶 A（100 μg/mL）37℃处理 30 分钟，降解细胞内 RNA。

4. 与其他染料的兼容性：

• 可与多种荧光染料（如 FITC、Cy3、Texas Red）联合使用，因其发射光谱（蓝色）与常见荧光通道重叠较少，适合多色共染实验。

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

主要实验应用

1. 细胞核染色（最经典应用）

• 细胞形态学观察：DAPI 可穿透细胞膜（活细胞或固定细胞均可），与细胞核内的 DNA 结合，清晰显示细胞核的形态、数量及分布，常用于：

• 细胞计数（通过计数蓝色荧光细胞核数量）；

• 观察细胞凋亡时的核固缩、碎裂现象；

• 分析细胞周期中细胞核的变化（如分裂期染色体形态）。

• 共定位实验：作为细胞核标记的 “金标准”，常与其他荧光标记（如抗体偶联的荧光染料、GFP 融合蛋白）联合使用，通过荧光显微镜或共聚焦显微镜分析目标蛋白与细胞核的位置关系。

2. 流式细胞术分析

• 细胞周期检测：DAPI 与 DNA 结合的量与 DNA 含量成正比，通过流式细胞术检测荧光强度，可将细胞分为 G₀/G₁期（低荧光，2n DNA）、S 期（中等荧光，DNA 复制中）、G₂/M 期（高荧光，4n DNA），计算各时期细胞比例。

• 死细胞区分：活细胞的细胞膜对 DAPI 通透性较低，而死细胞的细胞膜破损，DAPI 可大量进入并染色，因此可用于区分活细胞与死细胞（常与活细胞染料如 Calcein-AM 联合使用）。

3. 微生物染色

• 对细菌、真菌等微生物的细胞核（或拟核）也能有效染色，可用于微生物的计数、形态观察或与宿主细胞的共定位研究。