油红O

油红O（Oil Red O）是一种脂溶性偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，能特异性地使组织和细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等染色。当组织切片置入染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质（如脂滴）中，使组织内的脂滴呈红色。用于分析细胞样品中脂质状况。油红O染色法，由于其观察性更好，染色更深，因此，目前已广泛的替代了其他脂质染色法，如苏丹III、 染色法等。

油红O主要用于病理状态下组织脂肪的检测。正常情况下，除脂肪细胞外其他细胞内一般不见或仅

见少量脂滴。在病理状态下这些细胞中出现脂滴或脂滴明显增多，特别是在心、肝、肾等实质器官发生脂肪变性时，胞浆内出现大小不一的空泡，这时需用脂肪染色鉴定该空泡是否为脂肪变性；此外，脂肪染色还有其他多种用途：1）在动脉粥样硬化时，用脂肪染色可检测内皮细胞下的脂质沉着；2）显示脂肪栓塞栓子内的脂质，从而确诊脂肪栓塞；3）用于肿瘤组织的鉴别诊断，由脂肪组织所发生的肿瘤在与其他组织来源的肿瘤相区分时，可以借助脂肪染色，脂肪组织所发生的肿瘤，脂肪染色为阳性。

中文名称

油红O(苏丹红)

英文名称

Oil Red O

别名 苏丹红

CAS 1320-06-5

分子式 C26H24N4O

分子量 408.49

纯度/级别 ≥75%

储存条件

RT保存，有效期5年。

   - 外观：红色至暗红色结晶粉末，易吸潮，对光敏感，需避光保存。  

   - 溶解性：  

     - 不溶于水，易溶于有机溶剂（如异丙醇、乙醇、氯仿、苯、丙酮），在乙醇中呈浅黄红色。  

     - 浓硫酸中显浅蓝绿色，稀释后产生蓝紫色沉淀。  

光谱特性  

   | 状态       | 最大吸收波长（nm） | 典型发射颜色      |  

   |----------------|-------------------|-------------------|  

   | 游离油红O  | 507               | 浅黄红色          |  

   | 脂质结合态 | 510-517           | 橙红至鲜红色      |  

   表：油红O的光谱特性（数据源自）

作用机制与染色原理

- 选择性染色：油红O在脂质中的溶解度远高于有机溶剂。染色时，染料从溶液中转移至脂质结构（如脂滴），通过物理溶解而非化学反应使中性脂肪（甘油三酯、脂蛋白）呈现橙红色。  

- 特异性：  

  - 对中性脂质（甘油三酯）亲和力最强，对磷脂和类固醇染色较弱。  

  - 不穿透完整细胞膜：仅染色固定后或膜破损细胞的脂滴。  

- 温度依赖性：适当升温（37°C–60°C）可增强染色效果，因液态脂质更易结合染料。

实验操作指南

 1. 溶液配制

- 母液（饱和溶液）：  

  0.5 g油红O粉末 + 100 mL异丙醇，60°C水浴加热30 min，过滤去除不溶物。  

- 工作液：  

  母液与蒸馏水按 3:2比例 混合，静置10 min，再次过滤上清使用（现配现用）。  

 2. 染色流程（以细胞为例）

A[细胞固定] --> B[4%多聚甲醛固定15 min]

B --> C[PBS漂洗3次]

C --> D[60%异丙醇预处理20 s]

D --> E[油红O工作液避光染色30 min]

E --> F[60%异丙醇分化5 s]

F --> G[水洗后苏木素复染核]

G --> H[甘油明胶封片观察]

```

- 关键参数：  

  - 染色时间：30 min（细胞）或 8–10 min（切片）。  

  - 分化：60%异丙醇短时浸洗（≤5 s），避免脂滴溶解。  

 3. 结果判读  

- 阳性信号：脂滴呈橙红至鲜红色，细胞核呈蓝色（苏木素复染）。  

- 阴性背景：无脂质区域无色，若出现沉淀提示过滤不充分或溶剂挥发。  

-注意事项与常见问题

1. 样本处理要点  

   - 避免有机溶剂固定：酒精/丙酮会溶解脂质，推荐4%多聚甲醛或甲醛-钙固定。  

   - 切片类型：仅适用冰冻切片（石蜡切片需脱蜡，易丢失脂质）。  

   - 厚度控制：切片过薄（<5 μm）易导致脂滴丢失，推荐8–15 μm。  

2. 染色优化  

   - 降低背景：  

     - 染色容器加盖密封，防止异丙醇挥发形成沉淀。  

     - 染色后彻底分化（60%异丙醇）。  

   - 提高信噪比：双次过滤母液+工作液，去除颗粒杂质。  

3. 保存与安全性  

   - 储存：  

     - 粉末：室温干燥避光，有效期5年。  

     - 溶液：避光保存，12个月（母液可-20℃长期储存）。  

   - 安全风险：  

     - 易燃（闪点12°C），远离火源。  

     - 潜在致癌性，操作时戴手套、口罩，废弃液需活性炭处理。  

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

 主要应用场景

 1. 病理诊断与疾病研究

- 脂肪变性检测：  

  - 心、肝、肾等器官脂肪变性时，胞内空泡经油红O染色呈红色，区别于其他变性类型。  

  - 动脉粥样硬化：染色血管内皮下的脂质沉积，评估斑块形成。  

- 肿瘤鉴别：脂肪源性肿瘤（如脂肪瘤）染色阳性，与非脂肪肿瘤区分。  

- 脂肪栓塞诊断：显示栓子内的脂质成分。  

 2. 细胞生物学研究

- 干细胞分化：标记脂肪细胞分化过程中的脂滴积累，用于成脂诱导实验。  

- 储脂细胞鉴定：  

  - 肝星状细胞、胰腺星状细胞（PSCs）在未活化状态含丰富脂滴，染色呈“戒环状”围绕细胞核；活化后脂滴消失。  

  - 白血病细胞：标记伯基特淋巴瘤/白血病中的含脂液泡。  

 3. 多领域拓展应用

| 应用领域       | 具体用途                          | 染色特征               |  

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| 组织学         | 冰冻切片中性脂质染色              | 脂滴呈红色，背景无色   |  

| 细胞培养       | 脂肪细胞分化定量                  | 脂滴橙红色，核淡蓝（若复染）|  

| 微生物学       | 脂质代谢研究（如酵母）            | 液泡或脂滴着色         |